抗ドキソルビシン抗体(IgG2b)

Anti-Doxorubicin (mouse IgG2b,λ)

Optimal dilutions/concentrations should be determined by end user.

DXR-BSA あるいは対照BSA 各々50 μg/50 μL PBS をELISA 用96 穴マイクロタイタープレートの各穴に分注し、37 ℃で一晩乾燥させてプレートに付着させます（または4 ℃で一晩静置）。
プレートを0.05 % Tween 20 を含むPBS (PBS-T) 150μL で5 回洗浄後、2 % FBS（牛胎児血清）溶液 150μLを加え、37 ℃ で30 分間インキュベートすることにより、抗体の非特異的吸着をブロックします。
PBS-T で5 回洗浄後、各濃度に希釈した抗体溶液（1 次抗体）100 μL を加え、37 ℃ で30 分間反応させます。
PBS-T で5 回洗浄後、3000 倍に希釈した2 次抗体 (Peroxidase-F(ab’)2 fragment of Goat anti-mouse IgG,Zymed) 100 μL を加え、37 ℃ で30 分間反応させます。
PBS-T で5 回、Citrate-phosphate buffer (pH 5.0)で1 回洗浄後、基質溶液 (o-Phenylene diamine 0.4 mg/mL,H₂O₂ 0.06 %) 100 μL を加え、37 ℃ で正確に30 分間反応させます。
2.0 M H₂SO₄ 50 μL で反応を停止させた後、492 nm での発色度を96 穴マイクロプレート用光度計で測定します。